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问题：融合PCR技术是采用具有互补末端的引物，将不同来源的扩增片段连接起来的方法，其过程如图1所示．图2是中间载体1和中间载体2（利用融合PCR技术构建成）构建成叶绿体定点整合表达载体示
答案：↓↓↓ 邵海荣的回答： 网友采纳 （1）根据图示和PCR扩增技术的特点，可以推导出图1第一阶段中PCR至少经过2次循环才可以得到双链等长的DNA，如图所示： 再根据图1中第二阶段是AB基因融合后，进行PCR扩增时需要引物1和引物4，可推导出第二阶段中引物2与引物3部分碱基互不配对使得两DNA能成功“搭桥”连接起来． （2）若通过融合PCR技术将启动子、标记基因、目的基因、终止子拼接起来，启动子与标记基因连接需要2种引物部分碱基配对，同样标记基因和目的基因、目的基因、终止子连接也各需要2种引物，同时在搭建而成的长的DNA分子的两端各需要1种引物，所以最终需要设计1+2+2+2+1=8种引物，其中两端的2种引物不能起“搭桥'的作用，因此能够起着“搭桥”作用的引物有8-2=6种． （3）根据图2显示，中间载体1的启动子一端有SpeI的切割位点和在终止子一端有SalI切割位点．并且“启动子-目的基因-终止子”这一段是插入在中间载体2的SpeI、SalI切割位点之间，因此构建如图的定点整合表达载体需使用SpeI、SalI和DNA连接酶．基因表达载体包括启动子、目的基因、终止子、标记基因和复制原点，途中定点整合表达载体上未标出的结构是复制原点． （4）叶绿体定点整合表达载体中叶绿体同源重组基因1和叶绿体同源重组基因2能使目的基因准确插入叶绿体DNA上的特定位点上．与利用农杆菌转化法相比，利用定点整合表达载体将目的基因导入叶绿体中的优点是能实现定点整合到叶绿体中，且不易随花粉扩散带来安全问题． 故答案为： （1）2 互补配对 （2）8 6 （3）SpeI、SalI复制原点 （4）叶绿体同源重组基因1和叶绿体同源重组基因2 能实现定点整合到叶绿体中，且不易随花粉扩散带来安全问题 | 
