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问题：【cDNA文库构建的方法与过程分别是什么?】
答案：↓↓↓ 李浙昆的回答： 网友采纳 cDNA文库是指某生物某发育时期所转录的全部mRNA经反转录形成的cDNA片段与某种载体连接而形成的克隆的集合.经典cDNA文库构建的基本原理是用Oligo(dT)作逆转录引物,或者用随机引物,给所合成的cDNA加上适当的连接接头,连接到适当的载体中获得文库.其基本步骤包括：RNA的提取(例如异硫氰酸胍法,盐酸胍—有机溶剂法,热酚法等等,提取方法的选择主要根据不同的样品而定),要构建一个高质量的cDNA文库,获得高质量的mRNA是至关重要的,所以处理mRNA样品时必须仔细小心.由于RNA酶存在所有的生物中,并且能抵抗诸如煮沸这样的物理环境,因此建立一个无RNA酶的环境对于制备优质RNA很重要.在获得高质量的mRNA后,用反转录酶Oligo(dT)引导下合成cDNA第1链,cDNA第2链的合成(用RNA酶H和大肠杆菌DNA聚合酶I,同时包括使用T4噬菌体多核苷酸酶和大肠杆菌DNA连接酶进行的修复反应),合成接头的加入、将双链DNA克隆到载体中去、分析cDNA插入片断,扩增cDNA文库、对建立的cDNA文库进行鉴定.这里强调的是对载体的选择,常规用的是λ噬菌体,这是因为λDNA两端具有由12个核苷酸的粘性末端,可用来构建柯斯质粒,这种质粒能容纳大片段的外源DNA. | 
