问题：【primer5.0引物设计所用序列为什么是mRNA?做qRT-PCR时设计引物是直接将NCBI的mRNA区域中CDS区序列拷贝到primer5.0里面,可是做qRT-PCR前不是有一步是将RNA逆转录成cDNA吗?那以mRNA设计引物不是反了吗?我】
网友采纳 设计引物的时候已经用到了两条链吧,一条链设计前引物,另一条设计后引物.RT-PCR得到的是双链cDNA,所以用mRNA设计或者用互补链设计都可以啊,因为着两条链都会用到,只要把U换成T,是绝对可以P出来的.
曹永清的回答：
网友采纳 逆转录分三步，第一步是以mRNA为模板形成一条单链cDNA，第二步是水解mRNA，第三步是以单链cDNA为模板形成双链cDNA。大多数反转录酶都具有多种酶活性，主要包括以下几种活性。①DNA聚合酶活性；以RNA为模板，催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物，多为赖氨酸的tRNA，在引物tRNA3'－末端以5'→3'方向合成DNA。反转录酶中不具有3'→5'外切酶活性，因此没有校正功能，所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高。②RNaseH活性；由反转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子，将由RNaseH从RNA5'端水解掉RNA分子。③DNA指导的DNA聚合酶活性；以反转录合成的第一条DNA单链为模板，以dNTP为底物，再合成第二条DNA分子
