【westernblot!拜托各位大侠看看我跑出这个条带到底是什么问题啊.我先说下我的条件：跑的蛋白44KD,胶的浓度分别是5%和12%.转膜：湿转1.5h,0.25A封闭：5%脱脂牛奶2h,室温一抗：1:2023°过夜二抗：1】

问题：【westernblot!拜托各位大侠看看我跑出这个条带到底是什么问题啊.我先说下我的条件：跑的蛋白44KD,胶的浓度分别是5%和12%.转膜：湿转1.5h,0.25A封闭：5%脱脂牛奶2h,室温一抗：1:2023°过夜二抗：1】

答案：↓↓↓

刘希远的回答：

网友采纳　　转膜电流太大了,有可能是转过了,建议你用丽春红染下膜,看看蛋白条带是否清晰.我一般用恒压75V,这样子电流只有一百多毫安,差不多也就是五十多KD的蛋白；背景高的话可以加大脱脂奶粉的浓度,用7.5%的,另外脱脂奶粉里可以再加入0.5%的二抗来源动物的血清,漂洗要彻底,TBST10min4次.不知你用的是哪个公司的抗体,我的一抗一般都是1:2000-1:5000,可能你抗体浓度也高了,但是你的目的条带并不清楚,所以也不敢确定.你可以尝试改一下条件,如果还不好的话,很有可能是你抗体的原因了.　　WB就是很奇怪,一次做出来不一定次次都能出来