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问题：如何提高外源基因片段在原核细胞中表达量
答案：↓↓↓ 邵长春的回答： 网友采纳 在实际情况下,在做克隆插入片段的时候已经把有的序列优化了(例如选择较常见的密码子),以两个TAA来有效终止(基本上一个也够啦).其他的都已经由你选择的那个载体决定了. 到了蛋白表达这步,首先选择在什么细胞系里表达啦.原核细胞(大肠杆菌吧)一般要试不同的strain(细胞系),有的是翻译系统经过优化的(例如使信使RNA更稳定啦,增加几个罕见的转运RNA来对应那些罕见的密码子啦),有的是细胞里有辅助蛋白的(使你要表达的蛋白能准确折叠).转化涂板之后得到很多colony,一定要试多个不同的克隆(colony),因为天知道有的克隆就是表达得比另一个好.另外还有这些变量要去优化:诱导的时间(细胞密度,测OD600,一般在0.6左右为佳),诱导剂(例如IPTG)的浓度,蛋白表达的温度和时间(经验证明,温度真是很重要!). 希望对你有帮助~ | 
