※题型：读图填空题※知识点：读图填空题※试题难度：中等
普通棉花中含β
-
甘露糖苷酶基因(
GhMnaA2
),其能在纤维细胞中特异性表达,产生的β
-
甘露糖苷酶催化半纤维素降解,使棉纤维长度变短。为了培育新的棉花品种,科研人员构建了反义
GhMnaA2
基因表达载体,利用农杆菌转化法导入棉花细胞,成功获得转基因棉花品种,具体过程如图。请分析回答:
1.E6启动子的基本单位是,①过程中所用的限制酶是。
2.基因表达载体除了图示组成外,至少还有复制原点、等。(答两个)
3.③过程中用酶切法可鉴定正、反义表达载体。用SmaⅠ和NotⅠ酶切正义基因表达载体获得0.05kb、3.25kb、5.95kb、9.45kb四种长度的DNA片段,则用NotⅠ酶切反义基因表达载体获得的DNA片段长度应是和。
4.④过程中利用农杆菌介导转化棉花细胞的过程中,整合到棉花细胞染色体DNA的区段是。
5.转基因棉花新品种棉纤维更长的直接原因是不能合成,根本原因是。
6.艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质作出了重要贡献,也可以说是基因工程的先导,如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示,那么,这一启示是。
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※题型：读图填空题※知识点：读图填空题※试题难度：中等
径柳匙叶草是一种泌盐植物,科研工作者将径柳匙叶草液泡膜Na
+
/K
+
逆向转运蛋白基因(TaNHX2基因)转移到棉花细胞内,获得了转基因耐盐棉花新品种。图1是获取的含有目的基因的DNA片段,
Sau
3AⅠ、
Eco
RⅠ、
Bam
HⅠ为三种限制酶,图中箭头所指为三种酶的酶切位点;图2是三种限制酶的识别序列与酶切位点示意图;图3是土壤农杆菌中用于携带目的基因的Ti质粒结构示意图。请分析回答问题:
1.若图1所示DNA片段是利用径柳匙叶草的DNA直接获得的,则该获取目的基因的方法为。
2.不能在径柳匙叶草根尖分生区细胞中获得TaNHX2基因的mRNA,其原因是。
3.若用BamHⅠ切割图1所示的DNA片段,获得目的基因,则需选用切割图3所示质粒,以便构建基因表达载体,该方案的缺陷是。故切割图1所示DNA片段的最佳方案是选用。
4.用上述最佳方案构建基因表达载体,所得重组质粒(填“能”“不能”或“不一定能”)被BamHⅠ切割。
5.图3中,质粒上的抗生素抗性基因的作用是。
6.为了检测技术成果,科研工作者将转基因棉花种植在盐碱地中,观察其生长状况,这属于水平的检测。
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基因定点整合可替换特定基因,该技术可用于单基因遗传病的治疗。苯丙酮尿症是由PKU基因突变引起的,将正常PKU基因定点整合到PKU基因突变的小鼠胚胎干细胞的染色体DNA上,替换突变基因,可用来研究该病的基因治疗过程。定点整合的过程是:从染色体DNA上突变PKU基因两侧各选择一段DNA序列HB1和HB2,根据其碱基序列分别合成HB1和HB2,再将两者分别与基因HSV-tkl、HSV-tk2连接,中间插入正常PKU基因和标记基因neor,构建出如图所示的重组载体。重组载体和染色体DNA中的HB1和HB2序列发生交换,导致两者之间区域发生互换,如图所示。
style="VERTICAL-ALIGN:middle">1.构建重组载体时,常用的工具酶有___________。该实验用小鼠胚胎干细胞作为PKU基因的受体细胞以培育出转基因小鼠,除了胚胎干细胞能大量增殖外,还因为胚胎干细胞____________。
2.为获得小鼠的胚胎干细胞,可将小鼠囊胚中的________取出,并用________处理使其分散成单个细胞进行培养,培养过程中大部分细胞会贴附在培养瓶的表面生长,这种现象称为__________。
3.用图中重组载体转化胚胎干细胞时,会出现PKU基因错误整合。错误整合时,载体的两个HSV-tk中至少会有一个与neor一起整合到染色体DNA上。已知含有neor的细胞具有G418的抗性。HSV-tkl、HSV-tk2的产物都能把DHPG转化成有毒物质而使细胞死亡。转化后的胚胎干细胞依次在含有G418及同时含有G418和DHPG的培养液中进行培养,在双重选择下存活下来的是______的胚胎干细胞。
4.将筛选得到的胚胎干细胞培育成小鼠,从个体生物学水平检测,若小鼠___________,说明PKU基因成功表达。
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