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meili 发表于 2022-10-21 09:43:46

元谋栽培印楝枝叶化学成分的研究

印楝（Azadirachta indica）为楝科（Meliaceae）楝属（Melia Linn）植物，原产于南亚次大陆，包括印度、巴基斯坦以及缅甸等国。印楝有很强的昆虫拒食活性和杀虫活性，它是目前世界上公认的高效无毒无公害杀虫植物。它还是一种药用植物，在印度人们利用印楝的各个部位来治疗麻疹、眼疾、鼻出血、肠道寄生虫、皮肤溃疡等疾病。现代活性研究发现印楝有抗肿瘤、抗菌、抗病毒等活性甾体，印楝的化学成分及生物活性也一直是研究热点。我国曾在云南、海南和广东进行种植，以云南种植面积最大中国论文网。目前在云南元谋地区栽培的印楝均已成材结实，但是却未能得到实际有效的利用，转变为预期的生态农药，更加让人担忧的是这些印楝面临随时被砍伐的危险。为了能挽救这一闲置的资源，为开发利用这一资源探索新的途径，本研究组对采集于云南元谋县栽培印楝枝叶进行了化学成分的研究，从印楝枝叶的甲醇提取物中分离得到分离得到56个化合物，本文报道首次从中得到的15个化合物，分别为：nimbin (1)甾体，6-deacetylnimbin (2)，6-deacetylnimbinene (3)，nimbinene (4)，azadiradione(5)，7-acetoxy-elema-1,3-dien-8-ol (6)，1-naphthalenone (7), acarusnol (8)，colvane-2β,9α-diol (9)，乌苏酸(10)，马斯里酸(11)，2α-羟基乌苏酸(12)甾体，猕猴桃酸B (13)，2α,3α,4β-trihydroxypregnan-16-one(14)，2β,3β,4β-trihydroxypregnan-16-one(15)。1 材料和方法1.1 材料和仪器NMR在Bruker AV-400或 DRX-500核磁共振仪上测定，以TMS为内标。ESI质谱由Waters 2023 HPLC-Thermofinnigan LCQ Advantage 离子阱质谱仪或者API Qster Pulsar质谱仪测定。硅胶G（200-300目）及GF254薄层层析硅胶板购自中国青岛海洋化工厂。葡聚糖凝胶LH-20为Pharmacia公司生产。C-18反相材料（40-63 μm）为德国Merck公司生产。D101大孔吸附树脂为日本MitsubishiChemical Corporation生产。显色剂为10%硫酸水溶液及碘。1.2 植物来源印楝（Azadirachta indica）样品于2023年5月采自云南省元谋县杀虫植物印楝栽培基地，系引自缅甸的品种；植物标本由昆明植物研究所彭华研究员鉴定。标本（No. KIB 20232023）存放于昆明植物所植物化学与西部植物资源可持续利用国家重点实验室中国论文网。1.3 提取与分离自然晾干的印楝枝叶（47 kg）粉碎后，于室温下用甲醇提取4次，每次140 L甲醇提取16小时。合并提取液减压回收溶剂，得到含水的粗提物。将粗提物用乙酸乙酯萃取后浓缩得到2023 g萃取物，将萃取物硅利用硅胶色谱划分为4个极性段，分别是纯氯仿段Fr. A（146 g）、50:1氯仿–甲醇段Fr. B（497 g）、10:1氯仿–甲醇段Fr. C（157 g）及4:1氯仿–甲醇段Fr. D（180 g）。Fr. B用D101大孔树脂吸附甾体，20%甲醇水洗脱至流出液基本无色后用80-90%甲醇水洗脱，收集合并80-90%甲醇水洗脱液浓缩蒸干得303 g胶状物，将其用1.5倍量硅胶拌样，用7倍量硅胶进行柱层析，用石油醚–丙酮（1:0-1:1）系统洗脱分为油脂部分及TLC检测合并后的4个馏分Fr.1-4。馏分Fr. 1（110 g）先用反相划为3段：55%甲醇水馏分Fr. 1-1、70%甲醇水馏分Fr. 1-2及90%甲醇水馏分Fr. 1-3。再对各段用硅胶柱（200-300目，石油醚–乙酸乙酯、氯仿–丙酮或氯仿–甲醇梯度洗脱）和凝胶色谱（流动相为甲醇）反复层析，从Fr. 1-1得到化合物1（6.8 g），2（5.9 g），3（940 mg），4（480 mg）甾体，5（390 mg），从Fr. 1-2得到化合物10（4.2 g），从Fr. 1-3得到化合物6（40 mg），7（150 mg），8（95 mg）。Fr. C用大孔树脂吸附，依次用30% 、80%甲醇水及甲醇洗脱，将80%甲醇水洗脱部分合并浓缩得65 g胶状物，1.5倍硅胶拌样后10倍硅胶上柱并用25:1–10:1氯仿–甲醇系统洗脱，TLC检测合并分为4个馏分Fr. 5-8，对Fr. 7（19 g）反复用反相C-18、凝胶及硅胶柱（氯仿–丙酮和氯仿–甲醇梯度洗脱）层析甾体，得到化合物9（6 mg），11（9 mg），15（85 mg）。同样从馏分Fr. 8（25 g）得到化合物12（72 mg），13（97 mg），14（31 mg）。由于样品量较大，各馏分间有重复，未进行全部分离，化合物所得重量不是绝对含量。2 研究结果利用各种色谱方法从元谋栽培印楝枝叶中分离得到15个不同结构类型的化合物，并用NMR、MS等技术手段鉴定了其结构。化合物1：C30H36O9，无色针晶（丙酮）甾体，ESIMS m/z 563 +，1H NMR (CDCl3, 400MHz): δH 7.32 (1H, m, H-21), 7.23 (1H, m, H-23),6.34 (1H, d, J = 10.1 Hz, H-3), 6.33 (1H, m, H-22), 5.88 (1H, d, J = 10.1Hz, H-2), 5.56 (1H, m, H-15), 5.21 (1H, dd, J = 12.4, 2.9 Hz, H-6), 4.04(1H, d, J = 2.9 Hz, H-7), 3.73 (3H, s, 28-OCH3), 3.69 (1H, d, J = 12.4 Hz, H-5), 3.65 (3H, s, 12-OCH3), 2.04 (3H, s, H-Ac), 1.66 (3H, d, J = 1.5 Hz, H-18), 1.35 (3H, s, H-28), 1.34 (3H, s, H-29),1.28 (3H, s, H-19)；13CNMR (CDCl3, 100MHz) 数据见表1中国论文网。其MS及NMR数据与文献报道的nimbin一致。化合物2：C28H34O8,无色针晶（丙酮），其NMR数据与化合物1十分相似，比较可知其只是少了一个乙酰基，且与文献报道的6-deacetylnimbin一致。化合物3：C26H32O6,无色针晶（丙酮），ESIMS m/z 463 +；1H NMR (CDCl3, 400MHz): δH 7.32 (1H, m, H-21), 7.21 (1H, m, H-23),6.37 (1H, m, H-22), 5.60 (1H, m, H-3), 5.46 (1H, m, H-15), 4.05 (1H, m, H-6), 4.01 (1H, m, H-7),3.67 (1H, m, H-17), 3.59 (3H, s, -OCH3), 2.91 (1H, d, J = 12.5 Hz, H-5), 2.05 (3H, s, H-29), 1.70 (3H, d, J = 1.4 Hz, H-18), 1.33 (3H, s, H-30), 1.06 (3H, s, H-19)；13CNMR (CDCl3, 100MHz) 数据见表1。其MS及NMR数据与文献报道的6-deacetylnimbine一致。化合物4：C28H34O7，无色针晶（丙酮），与化合物3十分相似，比较可知其多了一个乙酰基，且与文献报道的nimbinene一致。表1 化合物1-6 13C数据No.12345No.123451201.6202.2213.2212.2158.21641.541.441.341.334.32125.9126.439.939.8125.41749.449.649.549.451.53147.6148.1119.1120.0204.61812.812.812.812.820.6447.947.7138.6136.744.11916.617.121.721.619.0541.543.647.243.046.120126.8126.8126.7126124.5668.666.166.369.123.721139.0138.9138.9138.8139.6784.586.986.385.174.422110.4110.4110.3110.4111.0847.047.347.247.742.723143.0143.0143.0143.0142.5938.539.037.136.938.628174.6175.521.31048.047.449.449.339.92917.216.414.014.227.01134.234.333.633.516.43016.717.517.417.127.312173.6173.6173.6173.532.9Ac170.6170.6170.113135.1134.9134.8135.147.1Ac21.021.121.114146.1146.7147.2146.3158.812-OMe51.751.651.651.61587.187.488.086.8119.028-OMe53.153.0化合物5：C28H36O4甾体，白色粉末，1H NMR (CDCl3, 400MHz): δH 7.25 (1H, m, H-23), 7.21 (1H, m, H-21), 7.15 (1H, d, J = 10.2 Hz, H-1), 6.27(1H, d, J = 1.9 Hz, H-22), 5.84 (1H,d, J = 10.2 Hz, H-2), 5.37(1H, dd, J = 3.2, 1.5 Hz, H-15), 5.25 (1H, m, H-7), 2.19 (1H, dd, J = 13.1, 2.2 Hz, H-5), 1.95 (3H, s, H-Ac), 1.22 (3H, s, H-30),1.19 (3H, s, H-19), 1.07 (3H×2, s, H-28, 29), 0.78 (3H, s, H-18)；13CNMR (CDCl3, 100MHz) 数据见表1。其NMR数据与文献报道的azadiradione一致。

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